【摘要】 目的研究蒺藜總黃酮最佳提取工藝條件。方法採用正交實驗，以提取物中總黃酮的含量作為考察指標，優選出最佳提取工藝。結果蒺藜總黃酮的最佳提取工藝條件為：提取時間1.5 h，提取溫度70～75℃，乙醇濃度70%，料液比1∶15(g/ml)，按照最佳提取工藝條件提取蒺藜全草中的總黃酮，含量可達7.152 mg/g。結論實驗設計的4因素中，提取時間對結果有極顯著的影響，提取溫度對結果有顯著的影響，乙醇濃度和料液比對結果影響不顯著。
【關鍵詞】 正交實驗; 蒺藜; 總黃酮; 紫外分光光度法
蒺藜Tribulus terrestrisl L.為蒺藜科(Zypophyllaceae) 一年生草本植物，廣佈全國,習稱硬蒺藜。蒺藜全草含有皁苷類、黃酮類、氨基酸類及糖類等成分[1,2]，在心血管系統及強壯、抗衰老、增強性功能等方面表現較強的活性[3～5]。研究發現蒺藜中黃酮類的含量是皁苷含量的1.5倍左右，所含黃酮類化合物的苷元主要為槲皮素(Quercetin)、山萘酚(Kaempferol)及異鼠李素(Isorhamnetin)，且以槲皮素為母核的黃酮類成分含量最高[6]。蒺藜總黃酮提取工藝的研究尚未報道。本研究採用正交實驗設計，對影響蒺藜總黃酮提取的因素進行了研究，為獲得其最佳提取工藝條件提供實驗依據。
1 材料與儀器
1.1 供試植物蒺藜植物材料於2006?07採自寧夏鹽池縣，由寧夏大學生命學院植物教研室陳彥雲教授鑑定為蒺藜科蒺藜屬蒺藜Tribulus terrestrisl L.。樣品採集後自然條件下陰乾，用萬能粉碎機粉碎後過40目篩,儲存於陰暗、乾燥處。
1.2 試劑蘆丁對照品(中國藥品生物製品檢定所);無水乙醇、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH等試劑均為分析純。
1.3 儀器TU-1810DSPC型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)、旋轉蒸發儀(Buchi，瑞士)、SHZ-D迴圈水式真空泵(河南鄭州長城科工貿有限公司)、電熱恆溫水浴鍋HH.S11-2(北京長安科學儀器廠)。
2 方法
2.1 樣品提取精密稱取蒺藜粉末2 g，共計9份，參照文獻[7,8]，採用L9(34)正交設計(見表3～4)迴流提取，固定提取次數為3次，抽濾，合併3次濾液，減壓蒸餾，回收乙醇，將提取液用無水乙醇定容於100 ml容量瓶中，搖勻，作為待測原溶液。各取上述待測原溶液5 ml，精密測定，置25 ml容量瓶中，加適量無水乙醇超聲溶解，稀釋至刻度，搖勻，靜置。取上清液5.0 ml置蒸發皿中，加入2.0 g聚醯胺粉吸附，於50℃水浴中揮去乙醇，然後轉入層析柱，先用25 ml石油醚洗脫，棄去洗脫液，再用無水乙醇洗脫，收集洗脫液(至鹽酸-鎂粉反應為陰性)，置25 ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，作為待測樣品溶液。
2.2 標準曲線的繪製精密稱取在120℃乾燥至恆重的蘆丁標準品5.0 mg，用無水乙醇溶解，定容至100 ml，得濃度為50 μg/ml的標準液。分別精密吸取上述蘆丁標準液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml置於10 ml容量瓶中，分別加5%亞硝酸鈉0.3 ml，放置6 min，再加10%硝酸鋁0.3 ml，放置6 min，加4%氫氧化鈉4 ml，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，放置15 min後，在分光光度計上於510 nm處測定其吸光度，無水乙醇為空白參比。以吸收度A為縱座標，濃度C為橫座標，進行迴歸分析，繪製迴歸曲線。結果在0～5 μg/ml的範圍內，濃度與吸光度有良好的線性關係。得出迴歸方程：A=0.064 9C+0.001 2(C:μg/ml)，r=0.999 8。
2.3 樣品總黃酮含量測定精密吸取上述待測樣品溶液1.0 ml，分別置10 ml容量瓶中，按照“2.1.2”項下的方法，在510 nm下測定其吸光度A，按回歸方程計算出提取物中的總黃酮含量。
2.4 方法學考察