摘要： 目的 考察超濾法純化金銀花提取液的最佳條件。方法 採用超濾法（分子截留值5 000），採用高效液相色譜法測定綠原酸的含量，篩選超濾壓力、藥液流速、迴圈時間3個因素的最佳條件。結果 壓力控制在0.05～0.07 MPa，迴圈流速控制在2 d/s左右，迴圈時間控制在2 h內，最終純化液幹浸膏中綠原酸高達44.10 mg/g.。結論 本法是純化金銀花葯材及其製劑的一種快速有效的方法。
關鍵詞： 超濾法；金銀花；綠原酸；純化條件
超濾法是20世紀60年代興起的一項膜分離新技術。國內已有人將超濾法運用到金銀花的提取中，以超濾法與醇沉法相比較,實驗結果顯示70%醇沉法較超濾法得到的提取物多，但綠原酸得率低，超濾法較水提醇沉法能更有效地保留有效成分［1］。
綠原酸分子量為354.3，採用超濾(分子量截留值5 000)可以除去其中的多糖、蛋白質等大分子物質。本實驗對高速離心後的水提液進行超濾，用高效液相色譜法測定超濾液中綠原酸含量，以確定超濾程度，避免有效成分的損失。
1 儀器與試藥
中空纖維超濾膜實驗室小裝置（北京旭邦膜裝置有限責任公司）；RB?15蠕動泵（天津紡織工學院膜技術工程公司機械廠）；中空纖維超濾柱CLW?003（聚醚碸，50 mm×300 mm，pH值2～13，截留分子量5 000）（北京旭邦膜裝置有限責任公司）；美國Agilent1100液相色譜儀系統；AL104型電子天平（梅特勒-託利多儀器上海有限公司）。
綠原酸對照品（中國生物製品檢定所提供，批號110753－200212），甲醇、乙腈均為色譜純試劑，磷酸為分析純試劑，水為超純水。藥材購自江蘇省藥材公司，由中國藥科大學中藥學院生藥學鑑定室鑑定為忍冬科植物山銀花Lonicera confusa DC.的乾燥花蕾或帶初開的花科。
2 實驗方法
2.1 綠原酸含量的測定
2.1.1 對照品溶液的製備 精密稱取在50 ℃真空乾燥至恆重的綠原酸對照品5 mg，置10 mL棕色量瓶中，加體積分數為50%的甲醇溶液溶解並稀釋至刻度，搖勻；精密量取1 mL，置10 mL棕色量瓶中，加體積分數為50%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含綠原酸50 μg)。因綠原酸受熱見光易分解，宜用棕色量瓶貯存並置4 ℃冰箱備用。
2.1.2 色譜條件 色譜柱YMC?Pack ODS柱（250 mm×4.6 mm）；柱溫：25 ℃；流動相：乙腈?0.4%磷酸（體積比13∶87）；流速為1 mL/min；檢測波長：327 nm。
2.1.3 標準曲線的製備 精密吸取對照品溶液(50.10 μg/mL)1,5,10,20,40 μL分別注入液相色譜儀，以綠原酸對照品的量為橫座標(x)，以綠原酸峰面積為縱座標(y)，計算迴歸方程為：y=158.69x + 2.1483，r=0.99998。結果表明綠原酸在0.0501～2.0040 μg範圍內呈良好線性關係。
2.1.4 樣品測定 精密吸取樣品溶液1 mL於10 mL量瓶中，相應溶劑定容，搖勻，採用隨行標準法。
2.1.5 供試品溶液的製備 提取液經0.45 μm濾膜濾過，即可。
2.2 超濾儀的使用
2.2.1 初用時的前期處理
①將超濾元件內的保護液放掉，儲液箱內加入清洗水，水壓不超過0.15 MPa，進水通過超濾元件經濃縮液口和超濾液口排出，不得小於10 min。
②採用質量分數0.2%～0.5%的氫氧化鈉溶液迴圈清洗30 min。清洗時濃縮液口排液量應稍大於超濾液口的排液量。
③蒸餾水清洗超濾元件，至少40 min。 2.2.2 執行 樣品（經高速離心後）從料液槽中經蠕動泵輸入中空纖維超濾柱，其中的大分子雜質從濃縮液出口回到原樣品料液槽中，而小分子藥液則在壓力驅動下透過超濾膜，從中空纖維外腔的透過液出口流出。如此反覆迴圈，直到達到分離和濃縮要求。超濾過程中，壓力通過調壓閥和蠕動泵的轉速來控制，流量通過蠕動泵的轉速調節鈕控制。超濾完畢，用蒸餾水等壓沖洗（關閉超濾液出口）數次，至達到要求。
2.2.3 清洗 每次執行完畢後，應對整個超濾系統進行清洗：用質量分數為0.2%～0.5%的NaOH溶液,浸泡2 h，迴圈清洗1 h;質量分數為0.2%～0.5%的HCl溶液，浸泡2 h，迴圈清洗1 h;用純水清洗至排出液pH值為6～7。
洗滌過程中可正、反向交替洗滌，如果汙染較嚴重則用質量分數為0.1%的過氧化氫進行清洗。
2.3 超濾條件的確定
在超濾裝置已經確定的情況下，可調整的操作條件主要有操作壓力、溫度、時間、迴圈流速等［2］。
2.3.1 操作壓力的確定 當操作壓力較低時，膜阻可近似為常數，此時膜通量與膜兩側的壓力差成正比，壓力過低，通量過低，純化效率低。隨著操作壓力的增加，膜通量增加，純化效率提高。但當操作壓力過高時，由於膜的結構比較疏鬆，這樣會使膜產生壓實或增厚，其通道變窄，膜阻增大，使溶質對流遷移到膜表面的速度增大，從而部分地或完全地抵消了錯流流動的剪下力所產生的在膜表面沉澱的溶質的遷移，膜通量下降。
通過實驗得出操作壓力對流速影響的曲線見圖1。從圖1可見，當操作壓力在0.05～0.07 MPa時，濃縮液的流速是最快的。
圖1 操作壓力對流速的影響（略）
Fig.1 The effect of operation pressure to flow rate
2.3.2 迴圈流速的確定 通常操作壓力及溫度一定時，超濾迴圈液流速對膜通量的影響十分顯著。低流速時，大分子物質趨向於在膜表面沉積，從而增加了濃差極化及凝膠層的.形成，此時濃差極化阻力以及凝膠層的阻力遠遠大於膜阻，膜通量主要受濃差極化及凝膠層的控制。
因此，為減少濃差極化及凝膠層的影響，在條件允許的情況下，應儘可能地提高迴圈流速。通過實驗，選取迴圈流速 2d/s或偏大一些，見圖2。
2.3.3 迴圈時間的確定 從圖3可看出，隨著時間的增多，超濾液不斷透過，濃縮液中大分子雜質量也在不斷地提高，2 h之後，濃縮液流速下降迅速。所以為了提高純化效率，節約操作時間，延長裝置使用壽命，超濾2 h即可。
圖2 超濾液流速的確定（略）
Fig.2 Determination of flow rate of ultrafitration
圖3 迴圈時間的確定（略）
Fig.3 Determination of circle time
3 結果與討論
3.1 本實驗選用分子量截留值為5 000的超濾膜，最終工藝定為超濾裝置壓力控制在0.05～0.07 MPa，迴圈流速控制在2 d/s左右，將原藥材100 g，水煎煮後合併提取液，高速離心後，進行超濾，收集超濾液。濃縮乾燥，測最終純化後提取物幹膏得率為6.12%，其中綠原酸為44.10 mg/g。
3.2 文獻［3,4］報道超濾法較醇沉法更能有效地保留有效成分,並能提高口服液的穩定性和澄明度。文獻報道中多選用分子量截留值為10 000的超濾膜,綠原酸得率為95.37%［1］。我們發現藥物中大部分有效成分分子量皆小於5 000,故採用5 000分子量的超濾膜,結果純化效果更佳，實驗過程中藥液雜質少，透明度高，因此超濾儀器的清洗及超濾膜的再生也較10 000級超濾膜簡單快速,可大大縮短工藝的時間。最終產品得率高，符合工藝要求。
【參考文獻】
［1］ 劉振麗，張秋海，歐興長．超濾及醇沉對金銀花中綠原酸的影響［J］．中成藥，1996，18（2）：5.
［2］ 孟根達萊,劉栓娣,青格樂.醇沉工藝對中成藥質量的影響［J］.中成藥,1996,18(3):516.
［3］ 劉振麗,張秋海,歐興長.超濾與醇沉對中研Ｉ號沖劑有效成分影響的對比研究［Ｊ］.中草藥,1998,29(7):451.
［4］ 劉振麗,張秋海,歐興長.超濾條件對中藥四妙勇安湯超濾的影響［Ｊ］.膜科學與技術,1999,19(2):554-556