關鍵詞： 北豆根總鹼 蝙蝠葛根 酸性染料比色法 高效液相色譜法
北豆根為防己科植物蝙蝠葛Menispermum dauricum ＤＣ．的乾燥根莖，其有效部位是生物鹼。現已知北豆根中含有近２０ 種生物鹼，總鹼含量可達１％以上，其中含量最高的生物鹼為蝙蝠葛鹼，其含量約佔總生物鹼的５０％左右［１］ 。北豆根總鹼（ＴＡＭＤ）對呼吸道致病菌有抑菌作用，尤其對肺炎球菌效果更為顯著。其製劑北豆根片可治療急性咽炎、扁桃體炎，經過多年的臨床應用已收入２００５ 版《中國藥典》。２００５ 版《中國藥典》用酸鹼滴定法控制含量，終點不易判斷，誤差大。本實驗採用酸性染料比色法測定提取物中ＴＡＭＤ 的含量，採用高效液相色譜法測定提取物中蝙蝠葛鹼的含量，從而用這兩個指標控制提取物的.質量。
１ 器材
ＨＰ －８４５３ 紫外－可見分光光度計；ＡＧ －２５４ 型電子分析天平（瑞士梅特勒）；ＷＴ －０２ 型電熱恆溫乾燥箱（北京恆星醫療器械廠）；ＺＦＱ －８５Ａ 型旋轉蒸發儀（上海醫械專機廠）；Ｒ２００２ 型旋轉蒸發儀（上海申順科技公司）；ＪＡＳＣＯ 高效液相色譜儀（ＵＶ －１５ 紫外－可見檢測器，ＲＵ －１５８０ 泵，ＣＫＣｈｏｍ 色譜工作站，日本）；北豆根飲片（市售，承德產，經鑑定為蝙蝠葛）；北豆根鹼（對照品，自制，含量９９．０％）；９５％乙醇、氨水、硫酸、三氯甲烷、無水甲醇、磷酸、酚酞為分析純； 甲醇、乙腈為色譜純。
２ 方法與結果
２．１ 酸性染料比色法測定提取物中ＴＡＭＤ 的含量［２］
２．１．１ 比色原理不吸收可見光的無色物質通過絡合、氧化還原等反應生成有色物質，可用於比色測定。實驗證明，溴甲酚綠在無水甲醇（ｐＨ ＝６）中，可與ＴＡＭＤ 直接絡合生成綠色化合物，用於比色測定。
２．１．２ 最大吸收波長的選擇精密稱取蝙蝠葛鹼對照品（６０℃乾燥至恆重）１０．０ ｍｇ 置５０ ｍｌ 容量瓶中，加無水甲醇溶解，最後用無水甲醇定容至５０ ｍｌ，作為對照品溶液。
精密吸取對照品溶液１．０ ｍｌ 置１０ ｍｌ 容量瓶中，加入０．１％溴甲酚綠溶液０．２ ｍｌ，用無水甲醇定容，在２００ ～７００ ｎｍ 進行掃描，選擇最大吸收波長，確定最大吸收波長為６２０ ｎｍ。
２．１．３ 顯色劑用量的考察分別精密吸取０．１％溴甲酚綠溶液０．１，０．２，０．３，０．４，０．５，０．６，０．７，０．８，０．９ ｍｌ 置１０ ｍｌ 容量瓶中，再分別加入對照品溶液１．０ ｍｌ，用無水甲醇定容，在６２０ ｎｍ 處測定吸收度。結果見表１。
表1 蝙蝠葛鹼與溴酚綠絡合後的吸收度（略）
結果表明，顯色劑用量為０．２ ｍｌ 時吸收度最大，故選用顯色劑用量為０．２ ｍｌ。
２．１．４ 顯色穩定性的考察以加入０．１％溴甲酚綠溶液０．２ ｍｌ的樣品為考察物件，在１２０ ｍｉｎ 內於６２０ ｎｍ 處測定吸收度，隨行試劑空白。結果見表２。