背景介紹:
隨著世界人口中老年人比例和絕對數量的不斷攀升，由衰老引起的人口老化相關疾病的發病率明顯升高，與衰老相關的疾病已成為科學家面臨的一項重要挑戰。由於這類疾病常伴有嚴重的認知障礙及精神異常症狀，甚至癱瘓和感覺障礙[1]，嚴重危害著老年人的健康，同時也給家庭、社會帶來了沉重的負擔。因此探討腦衰老機制，研究有效的延緩衰老程序的藥物，防治老年疾病己成為當今社會和醫藥學界研究的重大課題。
在諸多老年性疾病中，神經退行性疾病患病率逐年提高，已經成為影響人們健康水平和生活質量的重大社會問題。神經退行性疾病是中樞系統神經組織非正常退變引起的一類進行性功能缺陷與衰退疾病，如阿爾茨海默病(老年痴呆)，帕金森病，肌萎縮側索硬化症，亨廷頓氏舞蹈症等[2-4]。其中，老年痴呆的患病率佔老年人口的4.6%，其中半數為老年原發性退行性痴呆。流行病學調查也顯示，在65歲以上的人群中，老年原發性退行性痴呆的發病率達2.9%。該病具有複雜的病理生理過程，受基因調控和多種環境因素影響，是一類病因學和發病機制還不清楚的疾病。臨床上,對於這類疾病尚無有效控制病程進展的措施,患者最終將喪失生活能力甚至死亡。目前，我國人口老化速度居世界之首，老年人口已超過1億，因此尋求有效的預防和治療衰老疾病的藥物迫在眉睫。
我國中藥有著悠久的歷史，良好的治療效果，是中華民族傳統文化的燦爛瑰寶，在幾千年的實踐發展中，已形成了自己獨特的理論體系。特別是針對疑難病和慢性病，中醫藥更有它的獨到之處。中藥具有多靶點多效性特點，既可改善症狀以治標，又可提高機體抗病能力以治本，而且副作用較少、藥源豐富。中醫在治療老年性痴呆與記憶減退的數千年臨床經驗中積累了許多寶貴的.知識。自20世紀80年代以來，由於化學藥品開發所存在的技術難度高、價格昂貴、毒副作用明顯和環境汙染嚴重等實際問題，傳統中醫藥的研究受到了廣泛的關注。
地黃是常用的補益中藥，為玄蔘科植物地黃Rehmannia glutinosa Libsch的新鮮根莖或乾燥塊根，始載於《神農本草經》，被列為上品[5]。地黃在我國有1000多年的藥用歷史，應用十分廣泛，對免疫、血液、內分泌、心腦血管、神經系統及抗菌、抗炎等方面均有一定的作用[6]。單味地黃[7]和以地黃為主的複方在衰老及其相關疾病治療中的應用歷史也十分久遠。現代藥理學實驗發現其主要的活性組分為環烯醚萜苷類和地黃糖類。
梓醇是地黃中含量最高的的環烯醚萜苷類，屬於環氧醚型單萜類化合物。目前本實驗室分別在細胞和動物水平上證明了梓醇具有神經保護作用，可能是潛在的延緩衰老和治療神經退行性疾病如老年痴呆、帕金森疾病的藥物。由於衰老是各種神經退行性疾病發生的根本要素，研究梓醇的抗衰老作用對預防和治療該類疾病具有重要意義[8-9]。
實驗前期發現梓醇具有改善D-半乳糖致衰老模型小鼠記憶減退的功效，同時能提高腦組織抗氧化能力和能量代謝障礙,因此本研究利用D-半乳糖引起神經元老化的模型進一步研究梓醇抗衰老的作用機制，為該藥的開發和臨床應用奠定一定的基礎。
研究意義:
1、D-半乳糖致衰老神經細胞模型鮮見報道，明確該模型作用機制有助於利用此模型進行抗衰老藥物的篩選和機理研究。
2、梓醇在衰老動物模型上的效果明顯，利用細胞模型的研究有助於闡明梓醇抗衰老作用的分子作用機制。
研究內容:
採用小鼠腦神經元細胞原代培養,以D-半乳糖誘導體外神經元細胞衰老,並通過研究藥物梓醇的加入對神經元細胞的作用,進行細胞形態學觀察、細胞活力、細胞凋亡等綜合指標的測定。
實驗過程中應用細胞免疫組化染色和熒光染色技術、流式細胞儀、熒光顯微鏡、紫外分光光度計、熒光酶標儀等方法手段，研究梓醇在體外的神經保護作用機制。
預期達到的成果和水平:梓醇對D-半乳糖引起的小鼠腦神經元細胞衰老有保護作用.
因此本課題擬利用原代培養SD大鼠乳鼠腦皮層神經細胞，從超微結構、細胞週期分析及SA-β-半乳糖苷酶(Senescence associated β-galactosidase)化學染色等指標觀察D-半乳糖培養對神經元擬老化反應並從生化方面研究梓醇的抗老化作用。
研究重點難點:
1、掌握原代神經元細胞的培養、免疫組織化學等實驗技術。
2、明確D-半乳糖致神經元衰老的作用濃度和作用時間範圍。
3、初步研究D-半乳糖致神經元衰老的作用機理。
4、明確梓醇對D-半乳糖致衰老神經元的作用效果。
課題名稱 HPLC法測定伏立諾他有關物質和含量的研究
[研究的主要目的和意義]
vorinostat (商品名Zolinza) 是Merck 公司開發的世界上第一個抑制組蛋白脫乙醯基酶( his2tone deacetylase ,HDAC) 的新型抗癌藥物,該藥於2006 年10 月6 日獲得美國FDA 批准上市,用於其他藥物治療時或治療後仍不能治癒、或惡化、或病情反覆情況下的轉移性面板T 淋巴細胞瘤。vorinostat 化學名: N-羥基-N苯基辛二醯胺;英文名: N-hydroxy-N-phenyloctane-diamide
vorinostat 屬於組蛋白去乙醯化酶抑制劑類抗腫瘤藥物,低濃度( IC50 < 86 nmol·L - 1) 即可以有效抑制組蛋白脫乙醯酶HDAC1 、HDAC2 、HDAC3 和HDAC6 的活性,抑制組蛋白次乙醯化,因而從基因水平調控細胞週期,阻斷癌細胞基因複製,並激活其凋亡基因,達到抑制和殺滅癌細胞的效果。但vorinostat 的抗癌機制仍在深入研究之中,其具體作用機制尚不完全清楚[6 - 7 ] 。兩項臨床試驗證明了vorinostat 的安全性和有效性,其中包括107 名接受其他藥物治療後又復發的CTCL 患者。按面板損傷改善標準評分等級的判斷,接受Zolinza 治療的患者中30 %有所改善,療效平均持續168 d。