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論麥芽醇對AD大鼠空間記憶障礙的影響

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論麥芽醇對AD大鼠空間記憶障礙的影響
摘要: 目的 探討麥芽醇對AlCl3致阿爾茨海默病(AD)大鼠的影響。方法 採用AlCl3灌胃製作AD大鼠模型,Morris 水迷宮檢測大鼠空間記憶能力,免疫印跡檢測tau蛋白磷酸化水平。結果 麥芽醇明顯縮短大鼠尋找平臺的時間,降低tau蛋白磷酸化水平。結論 麥芽醇能有效改善因AlCl3所致的大鼠空間記憶障礙,其機制可能與抑制tau蛋白過度磷酸化有關。

關鍵詞: 麥芽醇;阿爾茨海默病;空間記憶;tau蛋白

麥芽醇是從小麥、大豆等的水解液中提取的單體化合物,其在體內外可與自由基結合,抑制膜脂質過氧化反應[1,2],在阿爾茨海默病(alzheimer’s disease,AD)中的作用未見報道。AD是老年人常見的一種慢性進行性神經退行性疾病,目前針對AD的藥物治療效果不明顯。由於AD的發病原因及機制沒有完全清楚,研究開發出真正具有預防或治療作用的藥物將有廣闊的前景和深遠的`意義。本實驗擬觀察麥芽醇對三氯化鋁(AlCl3)誘導的AD模型大鼠的影響。
1 材料和方法
1.1 實驗動物和分組
成年健康雄性SD大鼠60只,體質量200~250g,華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供。隨機分為對照組(Con)、AD模型組(AD)、麥芽醇組(maltol,MT),每組10只。
1.2 造模與用藥
AD模型組、麥芽醇組每日上午給予AlCl3(200mg/kg)灌胃,1次/d,連續9周;麥芽醇組自AlCl3灌胃第7d開始,除上午給予AlCl3外,每日下午給予麥芽醇10mg/kg灌胃,1次/d,連續8周,以上參照文獻[3]。
1.3 Morris 水迷宮檢測
造模結束後進行Morris 水迷宮檢測。測試用圓形水池直徑120cm,高60cm;圓柱形有機玻璃平臺直徑10cm,高40cm,平臺的頂端平面低於水池液麵2cm。室溫及水溫均保持在(26±2)℃,水以奶粉攪渾,整個背景均為乳白色,以避免老鼠用視覺搜尋平臺。大鼠在訓練前放入水池自由游泳120s,使其熟悉環境。訓練時將大鼠從任一象限1/2弧度處頭面向池壁輕放於水中,其游泳影象經水面上方1.5m處的攝像機拍攝並連線於路徑追蹤系統採集,通過微機分析,可提供潛伏期(即老鼠從入水點找到平臺所用時間)、路徑、搜尋策略等指標,本實驗選用潛伏期和游泳路徑衡量大鼠學習和記憶成績。每隻大鼠每天在4個象限各訓練1次,每次游泳時間限為120s,若在120s內未找到平臺者系統自動停止記錄,潛伏期記為120s,由測試者引導其上臺,休息30s後進行下一次訓練。採用的實驗策略為每組大鼠於第8週末開始連續訓練7d,以大鼠第7d訓練的成績作為測試成績,訓練時間每天固定在2∶00pm 到8∶00pm。將各組所得的成績作比較,可反映大鼠空間記憶保留情況。
1.4 免疫印跡檢測
水迷宮測試後立即將大鼠頸椎脫臼斷頭處死,隨後行海馬樣品製備、蛋白濃度測定、SDS 聚丙烯醯胺凝膠電泳以及轉移電泳,最後進行化學發光法顯影, 其過程大致如下: 0.1%TTBS 洗PVDF膜,5%脫脂奶粉封閉2h,1∶200兔多克隆R134d、PS396一抗(Santa Cruz Biotech, Inc.)4 ℃孵育過夜; 0.1 % TTBS 洗膜, 1∶200 稀釋的HRP 抗兔二抗室溫孵育1 h,0.1%TTBS 洗, 15min ×4 次,最後在暗室中進行化學發光法顯影,高敏感膠片攝片、洗片。
1.5 統計學分析
所有描述性資料用平均數±標準差 (±s)表示,統計學分析應用統計軟體SPSS10.0中方差分析,P